單細胞全基因組擴增試劑盒（PLEX）

單細胞全基因組擴增試劑盒（PLEX） 【產品名稱】 通用名稱：單細胞全基因組擴增試劑盒。 【包裝規格】 96 rxns。 【預期用途】 用于單細胞或微量樣本中 DNA 的提取和全基因組擴增步驟， 擴增產物可應用用于熒光 PCR、高通量測序、芯片等技術平臺。 【檢驗原理】 本試劑盒采用特殊引物多重退火成環擴增技術，實現單個細胞 全基因組高穩健和可重復的擴增，獲得的擴增產物可應用于 PCR 方法、芯片方法、或高通量測序方法，快速實現對單個細胞的全基 因組序列分析。 【主要組分】 試劑 24 rxns 48 rxns 96 rxns 細胞裂解緩沖液 122μL 243μL 485μL 細胞裂解酶稀釋液 122μL 243μL 485μL 細胞裂解酶 5μL 10μL 20μL 預擴增緩沖液 122μL 243μL 485μL 預擴增酶 5μL 10μL 20μL 擴增緩沖液 650μL 1300μL 2600μL 擴增酶 20μL 40μL 80μL 無核酸酶水 1000μL 2000μL 4000μL 【適用儀器】 普通分子實驗所需的常規儀器設備。 【儲存條件及有效期】 試劑盒置于-20℃（±5℃）下條件，有效期為 12 個月。 【自備試劑】 無核酸酶水、PBS 緩沖液、純化磁珠等。 【注意事項】 不同批次產品禁止混用。 【樣本要求】 本試劑盒適用于多種類型樣本的全基因組擴增，包括基因組 DNA、血細胞、組織、微生物等。 【使用前準備】 1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數 次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。 3. 為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的槍頭，吸取不同樣品 時請更換槍頭。 【實驗步驟】 I 細胞裂解 1. 按照下表配制細胞裂解反應體系， 組分 體積 單細胞樣本 2.5μL 細胞裂解緩沖液 2.5μL 細胞裂解酶稀釋液 4.8μL 細胞裂解酶 0.2μL 2. 瞬時離心后，置于 PCR 儀器運行程序： 循環 溫度 時間 1 75℃ 10min 1 95℃ 4min 1 22℃ ∞ II 預擴增反應 1. 按照下表配制預擴增反應體系， 組分 體積 上一步產物 10μL 預擴增緩沖液 4.8μL 預擴增酶 0.2μL 2. 瞬時離心后，置于 PCR 儀器運行程序： 循環 溫度 時間 1 95℃ 2min 12 95℃ 15sec 15℃ 50sec 25℃ 40sec 35℃ 30sec 65℃ 40sec 75℃ 40sec 1 4℃ ∞ III 擴增反應 1. 按照下表配制擴增反應體系， 組分 體積 上一步產物 15μL 無核酸酶水 34.2μL 擴增緩沖液 25μL 擴增酶 0.8μL 2. 瞬時離心后，置于 PCR 儀器運行程序： 循環 溫度 時間 1 95℃ 2min 14 95℃ 15sec 65℃ 1min 75℃ 1min 1 4℃ ∞ IV 產物處理 1. 保存方法：若擴增產物暫時不使用，可以保存于-20℃。 2. 純化方法：可以使用 1~1.5×純化磁珠進行純化。 3. 定量方法： 可以使用 Qubit 進行產物定量，不可使用 Nanodrop 定量。 4. 產量：使用基于特異性識別雙鏈 DNA 的熒光染料法進行測定(如 Qubit 等)：單細胞全基因組擴增產物產量≥ 1μg